本发明公开了一种估算不同食性土壤线虫生物量的方法，其步骤：A、采集土壤样品、提取线虫、热杀死线虫、固定线虫、制片和进行形态学鉴定；B、在显微镜下按照检索依据将线虫划分到四个食性类群，即食细菌、食真菌、植食性和杂食捕食性，对每条线虫拍照并用相关测量软件测量最大体宽，该步骤中不对线虫体长进行测量，根据食性按最大体宽估算；C、根据不同食性类群的生物量计算公式分别计算线虫的生物量大小。方法是根据不同食性线虫体长和最大体宽的线性相关关系，对传统估算方法进行的优化和改进，只需测量线虫最大体宽，简便易行，操作简单，具有极高的准确度，提高了线虫生物量估算的效率。